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稳转细胞株细节详解,轻松实现高调控效率和稳定性状的构建实验!

2023-08-21 18:17 作者:赛业生物  | 我要投稿

稳转株是指通过基因工程手段获得稳定过表达或抑制特定基因的细胞株。一般将目的基因序列或抑制目的基因的shRNA序列装载至重组载体中,再通过慢病毒系统或转座子系统将目的序列整合至宿主细胞的染色体中,实现目的基因持续、稳定的调控。


稳转细胞株被广泛应用于基因功能研究、小鼠疾病模型建立、小分子药物和抗体药开发等场景。赛业生物建立了一套成熟稳定的基因干扰和过表达的实验体系,针对多种不同细胞(包括难转染细胞),均可提供稳转细胞株的构建服务。



赛业生物稳转细胞株全流程构建服务


01

服务内容

👉基因编辑细胞株


👉体外检测


02

成功基因编辑细胞类型精选


03

服务优势

➢丰富的成功经验

超千例项目成功案例,超250种靶细胞经验,客户多篇文献引用发表。


➢多种转染或感染方式

慢病毒、PB转座子等多种策略。


➢高调控效率和性状稳定

可实现几十、百倍的过表达水平,经过十几代甚至更高的细胞传代后,仍然维持稳定的过表达性状。


➢丰富多样的体外检测

提供从基因、mRNA、蛋白到功能等全套体外检测服务。


➢严格的质控体系

双重检测细菌、支原体等微生物,100%确保无污染;进行细胞活率检测,保证交付质量。


➢细胞到动物的整体服务方案

提供从细胞基因表达调控、细胞功能验证、小鼠疾病模型建立到表型分析的全套服务。


04

服务案例

👉肿瘤模型细胞株构建

图1 MCF-7/luciferase细胞构建和鉴定结果


(A . Luciferase assay结果:luciferase高表达1000倍以上,显示成功构建MCF-7/luciferase细胞株;B. MCF-7/luc细胞株接种小鼠体内成像:显示MCF-7/luciferase细胞株可以在体内成瘤;C. 取骨后荧光成像:显示成功构建乳腺癌骨转移模型。)


👉抗原表达稳转细胞株构建

图2 K562稳转细胞株构建流式结果



K562过表达细胞株相比于对照细胞有一个log shift的位移,且阳性率为99.86%,表明成功构建K562过表达稳转株。


👉诱导型过表达细胞株构建

图3 基因A诱导型过表达细胞构建和鉴定结果



基因A过表达细胞株在DOX诱导下,相比于对照细胞有10倍以上表达,表明成功构建基因A诱导型过表达株。


👉体外药效评价服务

图4 CD19 CAR-T细胞体外药效评价实验检测结构


(A. CD19 CAR分子结构图示;B. CD19 CAR-T细胞阳性率检测结果;C. Nalm6细胞CD19抗原阳性率检测结果;D. CD19 CAR-T杀伤Nalm6细胞实验统计结果,显示CD19 CAR-T细胞对Nalm6细胞具有显著增强的杀伤作用;E. 杀伤实验上清中IFN-γ含量检测结果,显示同Nalm6细胞共孵育后CD19 CAR-T细胞的IFN-γ分泌能力均显著增强。)


赛业生物Smart-CRISPR™细胞基因编辑系统

Smart-CRISPR™细胞基因编辑系统基于AlphaKnockout基因打靶专家系统,借助强大的天河二号进行大规模超强度运算,将基因编辑细胞株的方案设计过程进行人工智能化。只需输入需要敲除的基因信息,系统会根据生物信息学算法,即可得到设计完善的方案,帮助研究人员轻松实现移码突变、片段敲除、多基因敲除等多种敲除策略。


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