Biacore 1k

2023-05-30 13:07 作者:窜上天的小柠檬 0人读过 | 我要投稿

S系列在蛋白孵育之后，芯片可以被放进50ml管里buffer保存方芯片，手动关门 douk chip 1换芯片仪器右侧: 2换缓冲液 water 去离子水洗进样针 waste 3 change solution 使管路都置于缓冲液中约6分钟 4 开样品仓 (程序or仪器下方按钮) 左侧放96孔板，右侧放reagent(放回时字朝自己)

今日例子蛋白和蛋白互作(抗原抗体) 1固定配体首先是用公式计算配体偶联量，配体150kd 11.8kd Rl 为1271 计算两倍的2500RU 其次是预富集，用醋酸钠稀释配体到20ug/ml, 按电脑最上方顺序设置条件: 选2号通道，数据采集频率 1 ，单位可设置为uM ，温度25 进样时间设置60 其他默认，reaction 50mM NaOH. 设置5.5 5.0....等条件 running 第一个5.5

第二个5.0

够用温和的原则，确定用5.5的pH 2偶联 CM5芯片第一个高偶联适合小分子，第二个适合蛋白质选通道时选1和2通道都活化(EDC, NHS 分装，置于-20℃保存)(芯片活化前后信号值会改变，前后差值在一般＞100)

封闭(乙醇胺4℃保存)，今日举例：只连2通道，后续有6步仪器会自动做个预富集后续会活化，偶联，封闭

target 模式，脉冲试进样，查看进样蛋白量是否达到设定值。 target 模式(蛋白和蛋白互作) 4 做再生条件筛选二点5.0。一点我这里面只有一个2.5就是这个2.5,然后的话我们现在要去进这个分析勿了其实现在,分析把它稀释成抑郁的浓度然后连续近几次样子就进一下这个分析,用这个咱们去洗然后再进这个再再进这个比如说我做过三次然后看一下,机械然后洗完之后第二次再进同样的这个样品的时候是不是达到差不多的,不过这两条都满足的话就说明我这个暂时也是ok的对吧就可以,我们现在就去做。第一次进样，再生后没有回到基线，是因为芯片刚使用不太稳定，重点看后面几次的再生情况