慢性肾盂肾炎动物模型【疾病动物模型】
慢性肾盂肾炎动物模型【疾病动物模型】
【造模机制】大肠杆菌由膀胱不完全梗阻输尿管逆行感染,早期可致单侧急性肾盂肾炎病变。晚期可致慢性肾盂肾炎病变,患侧肾脏变性萎缩、机体细胞免疫功能紊乱,抑制性 T细胞(Ts)功能低下,免疫球蛋白(IgA.IgM)增加,免疫活性细胞浸润,导致免疫病理损伤,造成肾组织结构的溶解,最终肾脏完全萎缩。
【造模方法】
1.动物和器材试剂选用 C57BL/6J 雄性小鼠,体重 18～20g,随机分组。大肠杆菌0m ：B：H,引自中国菌种保护中心；培养基:肉汤培养基、营养琼脂和半固体培养基。试剂:肠杆菌微量快速鉴定法,致病性大肠杆菌 O.iiB 诊断血清。羊抗鼠 IgG 血清和羊抗兔 IgG 酶标抗体,兔抗羊 IgG 酶标抗体。
2.模型制备造模前制备菌液,并对大肠杆菌进行鉴定,在接种动物前,将细菌接种于一只小鼠肾脏,24 小时取患肾细菌,将该增毒后的细菌溶于无菌盐水中,用比浊法调菌液浓度为(2~6)×10°/ml,立即接种模型动物。模型制作:小鼠术前禁水 24 小时,常规消毒,于下腹部正中切口 1.0cm。暴露右侧输尿管,用缝合线将其拉向右侧,并固定于腹壁外;挤出膀胱内残尿,向膀胱内注人大肠杆菌悬液约 0.2ml,缝合腹部切口,24 小时后拆去右侧腹壁外输尿管的固定线,正常清洁及饲养。单纯梗阻组:按实验模型方法手术,但膀胱内不注射菌液,以等量生理盐水代替。
3.样本采集和指标测定取样时间:实验模型动物分别在术后 6 小时,12 小时,24小时,48 小时,3 天.5 天.7 天、15 天,30 天,60 天,90 天、120 天、150天处死;单纯梗阻组动物分别术后 1 天、3 天.5 天处死。各组每阶段分别处死 7 只动物。
观察指标：(1）肾脏重量:称量双肾重量,以其所占自身体重的干分比表示其重量。
(2）细菌培养:尿及心脏血液定性培养。双肾按1g 肾重量相当于 1ml盐水体积计算，补加盐水至 1ml,制成勾浆,系列稀释定量培养,以每毫克肾组织所占的细菌数(个/mg),表示肾脏菌量。
(3)血清检测:血清 1gG:用单向扩散法,将羊抗鼠 1gG制成瘀脂扩散板,打孔向孔中加人血清,以扩散环直径表示血清 IgG 相对含量。
(4）血清大肠杆菌凝集效价测定:将大肠杆菌 OmB 溶于 5%甲醛中,用比浊法使其浓度为10*/ml,将血清倍比稀释,玻片凝集,以凝集的最大稀释倍数表示血清抗大肠杆菌凝集效价。
（5）肾脏形态观察:取部分肾组织,立即固定于 10%中性甲醛中 24 小时以上,常规石蜡切片,HE 染色。动物处死后立即取下肾脏,并速冻于液氮中,经冷冻切片后用丙酮固定,然后用羊抗鼠 IgG 抗大肠杆菌抗血清,进行 DAB 染色等免疫组化方法,检测 IgG 沉积及菌体抗原存在。
【模型特点】
1.可观察从急性感染到慢性萎缩,整个肾盂肾炎发展的全过程这是最突出的特点,尿细菌培养 6 小时起即为阳性,一直持续到 30 天,患肾感染 2 天内肾孟黏膜就出现广泛性化脓灶,髓质内出现不同程度中性粒细胞浸润,并有化脓灶形成,7 天后肾病变面积更加广泛并出现化脓灶和坏死灶,30 天转为慢性炎症细胞弥漫性浸润,60 天转为局灶性,90 天后患肾极度萎缩,肾组织破坏严重,免疫组化染色观察 30 天菌体抗原 IgG 有沉积,至 90 天仍有 1gG 沉积。
2.单侧患病,便于对照健患侧处在同一动物体内,感染机会,变化程度,肾脏重量等形成良好的自身对照。健肾始终未受病变累及,未见 IgG 沉积,说明本模型无自身免疫因素的参与,这是自身健患对照说明的重要理论问题。而且健肾又可代偿,可进行长期观察。
3.与人类相似,代表性强人类肾盂肾炎大多为大肠杆菌逆行感染,病变多为单侧或一轻一重,且形成慢性肾盂肾炎,多有梗阻,反流等因素存在。
4.全面系统,动态观察由于小鼠能长期存活,便于动态观察,能够获得每个阶段的血清学、免疫学、细菌学、病理学等多学科材料,为慢性肾盂肾炎的基础研究及防治提供了良好的实验动物模型。
【应用范围】研究慢性肾盂肾炎的发病机制,特别是与机体免疫功能的关系,研究慢性肾盂肾炎的病理变化及病变机制。还适用于中药治疗方法和药效学研究。
【注意事项】
1.术前禁水术前禁水,尿液浓缩,加之术中失血,失水,使动物处于脱水状态,输尿管无尿液下排,膀胱内的细菌很快经输尿管逆行感染到肾脏,致使在 6 小时后双肾均有细菌检出。
2.不全梗阻将 BrooRS 的方法加以改良,形成单侧输尿管暂时不全梗阻,使肾盂腔内的细菌进人肾实质而形成炎症。健肾无梗阻损害,早期感染的细菌随肾脏恢复排尿而被排出,肾内未形成明显的感染病灶。3.接种菌量菌液浓度为(2~6)×10*/ml较合适,浓度低不易感染或感染率低,浓度过高易形成菌血症。另外,尚与细菌的毒力有关,应先经动物体内繁殖 24 小时,增毒后使用。
【模型评估】肾盂肾炎是泌尿系统的常见病、多发病,慢性肾盂肾炎由于病程长,反复发作,防治难度大,多预后不良。单侧逆行性大肠杆菌感染的慢性肾盂肾炎模型,从致病菌、感染途径,病理和免疫改变等方面均与人类慢性肾盂肾炎相似,造模方法简单,感染率高,病变显著且均一,重复性好,是研究人类肾盂肾炎的理想动物模型。
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