SH-SY5Y(人神经母细胞瘤细胞)培养建议-杭州昊鑫生物

细胞介绍

英文名称：SH-SY5Y

中文名称：人神经母细胞瘤细胞

种    属：人源

组织来源：脑神经母细胞瘤，转移部位骨髓

生长特性：半贴壁半悬浮生长

细胞形态：上皮细胞样

传代比例：1:2 ~ 1:4

换液频率：2~3次/周

倍增时间：48-72h

培养体系：MEM/F12（或DMEM/F12）+15%FBS+1%P/S

培养条件：5% CO2 ；37 ℃

冻存条件：细胞冻存液，程序降温，液氮长期保存。

 

培养建议

一、细胞培养特点

1. 贴壁弱，消化时间短，注意控制消化时间；

 

2. 细胞传代容易成团聚集，可以通过控制细胞密度不超过80%，当密度到达或超过80%及时传代，传代时切勿暴力吹打，避免对细胞造成机械刺激，同时注意尽量吹散细胞；

 

3. 细胞生长偏慢，注意控制细胞密度不要过低；细胞密度过高时及时传代，避免培养基变黄导致细胞脱落或者状态变差。

 

二、细胞培养注意事项

1. MEM/F12以及DMEM/F12都可以培养SH-SY5Y细胞，但不同培养基培养之后会有部分形态差异；

 

2. SH-SY5Y细胞是成簇生长，饱和度高，其表现会是镜下观察密度低，但每团细胞簇密度大，可以根据培养基颜色进行换液；

 

三、细胞特点

1. 成团簇的形式生长

2. 由于SH-SY5Y细胞是三维团簇的方式生长，复苏和传代后会重新附着为三维岛（会有一些不会重新附着的簇）。生长最终会从岛屿状慢慢扩散开来，随着时间的推移，细胞会缓慢变成单层，这个时候细胞基本处于对数生长期。

3. SH-SY5Y细胞是一种本身生长缓慢的细胞，当细胞培养至细胞 70~80% 的汇合度，即可进行分瓶处理，一般T25培养瓶建议1:2传代，每周可传代2~3次，如果细胞生长速度比正常的时候更慢，可以适当提高血清到20%有利于促进生长。

4. SH-SY5Y细胞在复苏、传代后，细胞会有一些漂浮状态，这些漂浮细胞是正常现象，可以视为混合的贴壁和悬浮细胞系。一般复苏、传代培养3天后漂浮细胞会再继续粘附贴壁。直到生长从岛屿扩散开来并且在培养瓶内伸展开，通常在进行换液的时候我们会补加培养基，如果一定要全换液，可以通过离心收集悬浮细胞以1000转5min，并将悬浮细胞接种到新培养瓶。

5. SH-SY5Y细胞密度低时，生长缓慢，接种密度建议启动接种密度：8.0×104至 1.5× 105活细胞/cm2为宜，继代培养的接种密度：4.0 × 104至 1.0×105 活细胞/cm2。

 

常见问题

Q: 收货时细胞出现伪足，或是碎片较多怎么办？

A：受到运输影响，悬浮细胞会短暂性出现形态改变的现象，如伪足等。通过传代培养，1周左右可以恢复正常。一些细胞在运输途中死亡而产生碎片，通过传代离心可以去除（见上文传代篇）。

 

Q：培养过程中细胞发生贴壁怎么办？

A: 少量细胞贴壁属于正常情况，将细胞悬液转移至新瓶中即可。当贴壁细胞的比例高于20%，说明细胞生长环境有异常，需排查培养箱设置、培养基成分，以及培养器皿是否异常。

 

Q：培养过程中细胞发生聚团怎么办？

A：少量细胞聚团，呈葡萄串状，属于正常现象，特别是细胞密度较低时，易出现这种情况。更换血清品牌或增大血清比例（不超过20%）有助于解决聚团问题。不建议将聚团的细胞吹散，等待密度高时，会自己分散开。

 

Q：培养基里一定要加β-巯基乙醇吗？

A：β-巯基乙醇是一种常用的培养补充剂，有抗氧化的作用，可减少氧化应激对THP-1细胞的影响。当细胞密度过大但需要维持时，可适当增加巯基乙醇的比例（不超过标准量的1.5倍）。

 

Q：镜下观察时，难以聚焦或估算密度怎么办？

A：悬浮细胞会随着液体流动，不容易聚焦，静置5-10min使细胞沉底，之后在轻轻放上显微镜观察，将有助于聚焦和估算细胞密度。