小海龟数字PCR应用于胃癌的潜在诊断生物标志物筛查

数字PCR（dPCR）是一种核酸绝对定量的技术，与传统的荧光定量PCR技术（qPCR）相比，dPCR拥有可以精确到单个核酸分子的高精准度、适合复杂样本的高便捷度、且无需标准曲线或参照基因进行对比分析等特点。因此，高灵敏度、绝对定量、高稳定性和更高的抗干扰能力成为数字PCR的4大优势。 作为最常见的肿瘤之一，胃癌(GC)具有高死亡率，因为当前的检查方法不能实现早期诊断。核粒梭菌(Fn)主要定居在口腔中，据报道与胃肠道肿瘤的发展有关。迄今为止，关于唾液Fn和胃癌之间的关系知之甚少。该篇来自山东大学齐鲁医院文章确定唾液Fn能否作为诊断胃癌的生物标志物，并探讨Fn对胃癌细胞的影响。

实验方法：通过液滴数字聚合酶链反应对2019年1月至2020年12月山东大学齐鲁医院的120例GC患者、31例萎缩性胃炎(AG)患者、35例非AG (NAG)患者、26例胃息肉(GP)患者和20例正常对照(NC)的唾液中Fn的丰度进行定量。进行受试者工作特征(ROC)曲线分析，以评估Fn以及传统血清肿瘤标志物(包括癌胚抗原(CEA)、糖类抗原(CA) 19-9和CA72-4)的诊断价值。Transwell实验和伤口愈合实验评估Fn感染对GC细胞的影响。western blot法检测上皮间质转化(EMT)标记物的表达。 实验流程： ☆ 研究人员的样本收集，120例GC患者、31例萎缩性胃炎(AG)患者、35例非AG (NAG)患者、26例胃息肉(GP)患者和20例正常对照(NC)的唾液样本的收集，离心后储存在-80℃。 ☆ 凯杰QIAamp Blood Mini Kit试剂盒提取200ul唾液样本中的基因组DNA，浓度用Qubit 3荧光计测定。 ☆ 上海小海龟数字PCR仪进行Fn的测定，设计Fn的探针进行检测。 ☆ 细胞的培养，Fn的菌株培养 ☆ C细胞和Fn的菌株共培养，进行感染 ☆ 染后的GC细胞进行Transwell分析 ☆ 愈合实验，感染后的GC细胞进行Transwell分析，感染后用200 μL的移液管尖端进行直线刮擦，模拟伤口，随后，除去培养基和漂浮细胞，用无血清培养基代替，并捕获图像。细胞培养48小时后，再次拍摄图像。 ☆ Western blot分析，将感染Fn和未感染Fn的GC细胞裂解进行Western blot分析 实验结果：核粒梭菌(Fn)是一种牙周致病菌，常见于胃肠道肿瘤组织中。在此，研究发现胃癌患者唾液Fn水平升高，可作为胃癌诊断的潜在生物标志物，其诊断能力优于传统的血清肿瘤标志物。研究还发现唾液Fn水平与胃癌TNM分期和淋巴结转移呈正相关。此外，实验在试管内揭示了Fn通过促进上皮-间质转化过程来促进GC细胞的迁移和侵袭。该发现表明唾液Fn是诊断胃癌的潜在生物标志物。该研究表明唾液中Fn含量可作为诊断胃癌的生物标志物，Fn感染可通过加速上皮间质转化过程促进胃癌转移。

该篇研究用的是小海龟数字PCR仪设备进行Fn数字PCR检测。上海小海龟科技有限公司立足于基因检测上游仪器、芯片耗材与试剂开发的高新技术企业，其以微流控芯片技术为核心，已成功推出BioDigital 青数字PCR分体机、以及BioDigital • 炎和SCI Digital系列数字PCR全自动一体机，实现了基因检测与分子诊断前沿技术领域的重大原始材料科技创新和产业化突破。

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