Leadmium green AM dye；铅离子/镉离子探针

Leadmium green AM dye 提供了一种特异性荧光探针，能够以高灵敏度特异性测量细胞内铅和镉水平。Leadmium green AM 指示剂专为检测活细胞中的这些有毒环境污染物而设计。

Leadmium green AM dye产品特点：
※ 用于细胞内铅和镉含量测量的高度特异性指示剂
※ 灵活的形式允许用于多种检测方式—流式细胞分析、荧光显微镜成像以及微孔板读数仪
※ 明亮的荧光和对钙的高分辨力，可检测出纳摩尔水平的铅和微摩尔水平的镉
※ 采用 488 nm 激光线轻松激发
※  Leadmium green AM 易于加载，在酯酶切割乙酰氧基甲基基团后能很好地保留在细胞内。

实验试剂准备
1 从冰箱内取出一管Leadmium Green AM dye（50 µg），让其回温到室温，避光保存。
2 往管子内加入50µl 高质量无水的DMSO，避光混匀，使其充分溶解。
3 用生理盐水按照1：10的比例将Leadmium Green AM dye的DMSO储存液稀释成工作液（比如取20µl 储存液加到180µl生理盐水，混匀），所有溶液制备过程一直避光。
4 37℃温育生理盐水，用于后续多个步骤的清洗过程。
5 【可选】如果此实验需要设置相对对照（用一定浓度的PbCl2处理细胞），建议PbCl2的起始浓度范围是1nM-625nM。制备625nM PbCl2【添加250µl 10µM PbCl2到3.75ml生理盐水。然后做9次连续性梯度稀释最终得到1nM PbCl2】。37℃保存这些溶液直到需要。每个浓度需要1ml量。
6 【可选】如果此实验需要设置相对对照（用一定浓度的CdCl2处理细胞），建议CdCl2的起始浓度范围是1µM-250µM。制备250µM CdCl2【添加1ml 1mM CdCl2到3ml生理盐水。然后做8次连续性梯度稀释最终得到1µM CdCl2】。37℃保存这些溶液直到需要。每个浓度需要1ml量。
7 【可选】制备10mM TPEN工作液，通过添加1.2ml无水乙醇到5mg TPEN。混匀，室温保存。

图1.Jurkat细胞系中Leadmium Green AM dye染料的背景荧光。盐水中的细胞加载Leadmium Green AM dye并洗涤。使用488 nm激发和525/10 nm带通滤光片收集单色荧光。由于细胞中不存在细胞内铅或镉，因此该直方图表示Leadmium Green AM dye提供的背景荧光。

图2.Jurkat细胞系中含有PbCl2的Jurkat细胞的荧光。盐水中的细胞上样Leadmium Green AM dye并洗涤，然后在1μM PbCl 2盐水和1μM离粒霉素存在下孵育。使用488 nm激发和525/10 nm带通滤光片收集单色荧光。直方图显示细胞内铅阳性。