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PR Panta集结4种技术,前所未有地深入了解您的AAV样本!

2022-04-12 15:19 作者:NanoTemper  | 我要投稿

NanoTemper CEO-Philipp Baaske致辞

"多年来我们一直关注客户在基因治疗方面的研究需求。实验人员不得不使用有限数量的样品去尽可能检测多参数进行合理决策对我们来说,解决这个问题,是重中之重。"


基因治疗为逆转常见和罕见遗传性疾病带来了新希望,其中病毒载体腺相关病毒(Adeno-associated virusAAV)是开发治疗多种疾病(例如阿尔茨海默病、帕金森病和巴顿病等)的关键工具,并迅速成为体内基因导入主要平台之一。


因为AAV样品量一般非常有限,在进行多种参数检测时,获得有效且有助于合理决策的结果就会变得更加复杂。PR Panta首次突破在单次实验中,利用4种集成技术,在热变性过程中完成对载体的热稳定性和纯度的监测。无需任何标记,仅用少量样本,即可获得可靠的结果,帮您快速、轻松做出实验决定。


图注1:PR Panta四模块同时实时监测病毒载体的热变性行为


PR Panta 四项集成技术使您获得对基因治疗样本前所未有的洞察力。



模块1
动态光散射(DLS)——获得载体大小和纯度的信息

模块2
差示扫描荧光(nanoDSF)——对载体进行血清型分型并优化其稳定性

模块3
背反射(Backreflection)——监测大聚合物的形成

模块4
静态光散射(SLS) NEW!——监测载体携带的遗传物质数量,确认病毒颗粒的分子量以确保其正确组装


接下来,让我们具体看一下PR Panta的四个集成模块, 如何帮助您更好的了解AAV样品。


血清学分型

使用nanoDSF进行热变性分析,可以区分不同AAV血清型。此外,您可以确认批次间的相似性,查看生产变化如何影响样品的热稳定性。此外,较染料法DSF,使用nanoDSF技术进行检测可节约样品(LOD:2 x 1010 VP/mL;2 x  1011 GC/mL)


图注2:PR Panta检测不同血清型AAV Tm值与发表文章[1]一致


制剂条件优化

缓冲条件会影响AAV载体保存时间以及其转导效率,nanoDSF和Backreflection帮您筛选出能够提供最佳稳定性的制剂。



图注3:相同血清型样品在不同buffer条件下热变性曲线和聚集行为差异明显


监测样品纯度以获得更好的治疗效率

不充分的纯化过程导致副产物,降低您基因治疗产品的效率。DLS可展示制剂的均一性,确保获得高质量的产品。


●通过DLS可检测载体制备过程中VPP的聚集,减少聚集体对载体递送的影响,减少细胞毒性

●避免缓冲液和辅料筛选过程中不必要的聚集物,以减少聚集体的形成


图注4:使用DLS检测AAV2样品在基因组包装前后样品纯度及均一性


衣壳的组装及基因组包装

AAV样品的正确组装是进行基因治疗产品包装的必要条件,SLS可以确认病毒颗粒的分子量以确保其正确组装。


图注5:通过Debye Plot进行分子量计算


遗传物质装载

完美的治疗载体不仅需要优化它的衣壳,还需要确定它是否具有必要的基因有效载荷,nanoDSF和SLS均可监测载体携带的遗传物质的数量。


图注6:nanoDSF和SLS模块确定AAV实心率


储存和QC

储存条件影响基因治疗载体的功效,PR Panta允许您在工作流程的每个步骤中进行比较/质控,确保您优化/生产的是高质量,稳定的基因治疗产品。


图注7:加速压力条件下,AAV结构完整性的变化[2]


因此,无论您是在早期的开发过程中区分AAV血清型,优化存储条件或监测衣壳组装,PR Panta为您提供AAV稳定性的多参数表征。使用少量样本,获得可靠的结果,帮您快速、轻松地做出下一步的决定。




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