刘老师周六小课堂之《刘老师细说膜片钳》答疑

1.  Holding电压的设置只跟静息膜电位有关系吗？跟记录内液有关系吗？

答：静息膜电位与内液有关系，holding的设置目的：（1）随后打破细胞膜时，使细胞尽可能处于静息状态，一般holding设在静息膜电位附近；（2）超极化的holding有助于封接。所以holding的设置与静息膜电位有关。

2. 钠、钾离子的内向、外向整合电流是怎么回事呀?一直对这个感到很困惑

答：内、外向整流是离子通道的性质，不是离子的性质！整流是指随着膜电位去极化，通道电流的变化偏离欧姆定律（即I-V关系不符合直线关系）。内向整流是指电流逐渐靠近I-V曲线的X轴，外向靠近Y轴。例如，外向整流性K离子通道，随着膜电位的去极化，电流幅度越来越大，曲线偏向Y轴。

3. 如果不补偿膜电容的话对记录有什么影响呢？

答：影响是：（1）记录的快速开放的离子通道电流（如Na电流）会与Cm的充电电流混在一起，影响电流观察；（2）后续对串联电阻Rs的补偿讲不能进行；（3）Cm充放电电流比较大，可能会使放大器输入饱和，记录的电流表现为“刀切”一样，不仅不好看，而且常时间饱和会使放大器损伤。

4.“漏减”和“增益”是什么意思呢？

答：去除漏电流叫漏减（Leak subtraction）。增益（Gain）是放大倍数，是输出信号的放大，放大器上都可以设置放大倍数。

5.  700B补偿漏电流后一直回不到基线怎么处理，有时补了漏电流后反而偏离基线更远？

答：700B的漏电流补偿是执行的右图中红圈内的功能吗？这个功能你可以看着Membrane Test中的方波自动或手动调节，它不是将基线调零，而是使方波幅度为0。要想对漏电流进行补偿，要采用软件的P/N漏减功能，而这个功能与记录的基线无关。

6.  Axon holding current 应该控制在多少以内？

答：Holding current显示的是用于维持Holding的钳制电流，表现在基线偏离大小。我们可以计算一下：若holding = -70mV，Rm=500MΩ， 则holding current=140pA。所以大于140pA，则说明Rm低于500MΩ。一般holding curerent应小于200pA。