Cell Biolabs脂质提取试剂盒样品的制备方案
脂质是一类多样化的分子,包括单甘酯、二甘酯、三甘酯、脂肪、固醇等。脂质不仅定义和保持细胞膜完整性,还参与细胞过程,如膜转运、信号转导、细胞凋亡和能量储存。脂质代谢紊乱与多种疾病有关,如癌症、糖尿病、阿尔茨海默病和冠心病。 为了研究脂质,通常需要首先从组织或培养细胞中提取脂质。传统上,优先选择的是Folch方法进行有机提取,但该方法存在一些缺点。首先,它将脂质提取到底部的有机相中,在纯化过程中需要穿透上层含有蛋白质的相,导致脂质样本受到污染。因此,低纯度的脂质样本可能会阻塞高压液相色谱仪(HPLC)等仪器,从而妨碍下游的脂质分析。此外,Folch方法使用氯仿作为有机相溶剂。长期吸入氯仿会对肝脏产生影响,如肝炎和黄疸。此外,已经证明氯仿对动物具有致癌作用,导致肾脏和肝脏肿瘤的增加。实际上,美国环境保护局(EPA)将氯仿分类为B2组,即可能对人类具有致癌作用。 Cell Biolabs的脂质提取试剂盒(#STA-612)通过有机提取分离总脂质,但通过将脂质提取到上层无氯仿的有机相(适用于高通量提取),规避了上述缺点。将粗脂质样本(如血清或组织培养细胞沉淀)悬浮于一种专有醇中。在添加专有有机化合物后,混合物通过离心进行相的重力分离。然后将回收的上层有机相干燥并重新悬浮以进行下游脂质分析。每个试剂盒提供足够的试剂,可根据100 µL样本量进行最多50次提取。可以使用更大的样本量,每个试剂盒提供的提取次数会相应减少。 艾美捷脂质提取试剂盒组成: 脂质提取试剂A(零件号261201):一个25 mL琥珀色玻璃瓶。 脂质提取试剂B1(零件号261204):两个30毫升琥珀色玻璃瓶。 脂质提取试剂B2(零件号261205):一个20 mL琥珀色玻璃瓶。 脂质提取试剂C(零件号261203):一瓶25 mL 脂质提取试剂盒相关研究: 1. STA-613:脂质定量试剂盒(比色法) 2. STA-369:OxiSelect™人类氧化低密度脂蛋白(MDA-LDL)ELISA试剂盒(MDA-LDL定量) 3. STA-384:总胆固醇测定试剂盒(比色法) 4. STA-391:HDL和LDL/VLDL胆固醇测定试剂盒 5. STA-394:HDL胆固醇测定试剂盒 6. STA-396:血清甘油三酯定量试剂盒(比色法) 7. STA-398:游离甘油测定试剂盒(比色法) 8. STA-618:游离脂肪酸测定试剂盒(比色法) 9. STA-600:磷脂酰胆碱测定试剂盒 样品的制备: •血浆:使用柠檬酸盐、EDTA、肝素或草酸盐等抗凝剂采集血液,并通过倒置混匀。将血液在4°C下以1000 x g的速度离心10分钟。收集上清的血浆,避免干扰白色细胞沉淀层。样本应立即提取或存储在-80°C。 •血清:在无抗凝剂的管中采集血液。让血液在室温下凝结30分钟。以2500 x g的速度离心20分钟。去除黄色的血清上清,避免干扰白色细胞沉淀层。样本应立即提取或存储在-80°C。 •培养细胞:以1000 x g的速度离心5分钟,沉淀5-10 x 106个细胞。用1X PBS洗涤细胞一次,然后用100 µL 1X PBS重新悬浮最终的细胞沉淀。按照试剂盒方案中的描述进行提取。 •组织:使用手术刀/剃刀将组织小心切割成小片,并称量到50 mL锥形管中。加入足够的PBS使组织最终浓度达到2 mg/mL。在4°C下均质化组织。按照试剂盒方案中的描述,从整个组织匀浆中进行提取。