激光共聚焦显微镜（LSCM）的工作原理和应用

激光扫描共聚焦显微镜（LSCM）简介：

LSCM是一种高科技显微镜；它是在荧光显微镜成象的基础上加装激光扫描装置，使用紫外光或可见光激发荧光探针，从而得到细胞或组织内部微细结构的荧光图像，成为形态学、分子细胞生物学、神经科学、药理学、遗传学等领域新一代强有力的研究工具。

激光扫描共聚焦显微镜（LSCM）应用范围：

激光扫描共聚焦显微镜也是活细胞的动态观察、多重免疫荧光标记和离子荧光标记观察的有力工具。不仅可对活的或固定的细胞及组织进行无损伤的“光学切片”，进行单标记或双标记细胞及组织标本的荧光定性定量分析；还可以用于活细胞生理信号，离子含量的实时动态分析监测，粘附细胞的分选，细胞激光显微外科和光陷阱技术等。可以无损伤的观察和分析细胞的三维空间结构。

激光扫描共聚焦显微镜（LSCM）的基本组成：

l 光学显微镜部分

l 激光发射器

l 扫描装置

l 光检测器

l 计算机系统(包括数据采集，处理,转换，应用软件)

l 图像输出设备

激光扫描共聚焦显微镜（LSCM）对生物样品观察的优越性：

l 连续扫描 、三维

l 离子荧光标记

l 同时多重物质标记

激光共聚焦显微镜由于采用共聚焦与光学扫描系统结合的方式，即便是尖锐的轮廓或者无法触及的高纵横比零件也能全面进行分析。在测量表面粗糙度上，即便样品为弧形表面，也能完成直线及表面粗糙度的测量。在测量膜层厚度方面，其膜厚功能可以通过非破坏性方式来捕捉和分析膜层信息。使用激光扫描共聚焦显微镜时会涉及以下几个信息：①物镜倍率：它会影响到观察到的图像分辨率，物镜倍数越大所观察到的图像分辨率越高。②扫描模式：应根据样品的相貌状态和所需的量测参数来设置的，当非透明样品需要观察表面轮廓时一般采用的是表面轮廓扫描模式，而透明样品时将选择透明物上表面扫描模式。③ND滤镜：它改变的是样品反射回来光束能量的滤过情况，ND滤镜改变也会影响扫描的时间。④精准度：它改变的是激光共聚焦显微镜的量测精度模式，超精细设定会比标准设定更加符合样品的表面形貌特征，但是超精细的扫描的时间会比标准的长。⑤Z轴节距：它是改变在激光共聚扫描的时候每一个层面的相隔距离。

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