蛋白质翻译后修饰检测质谱和IP
蛋白质翻译后修饰鉴定就是对蛋白质翻译后修饰的类型(所结合的官能基团的种类)、修饰位点(结合官能基团的氨基酸残基种类和在肽链中所处的位置)以及修饰水平(有多少氨基酸残基发生修饰)等进行鉴定。在正常生理条件下,发生翻译后修饰的蛋白质含量相对较少,丰度较低,且处于动态变化之中,修饰与未修饰的蛋白质也混合存在。因此,要进行蛋白质翻译后修饰鉴定首先就要从蛋白质混合物中分离出某一修饰类型的蛋白质,在进行后续的鉴定。
免疫沉淀(Immunoprecipitation,IP)和质谱检测蛋白质翻译后修饰将免疫沉淀技术与质谱技术结合起来,可以同时实现翻译后修饰蛋白质的获取和后续鉴定两部分工作。IP技术利用抗体与抗原特异性结合的原理可以将目标蛋白从混合物中分离提取出来,因此可以用于从蛋白混合物中分离特定的翻译后修饰蛋白。将能与目标翻译后修饰蛋白特异性结合的抗体与含有该修饰蛋白的混合液一起孵育,抗体与目标修饰蛋白便相互识别并共价结合在一起,再通过洗脱技术即可以获得目标修饰蛋白。随后,再利用液相色谱-串联质谱技术(HPLC-MS)实现翻译后修饰类型、修饰位点以及水平的鉴定。