动物实验AAV感染指南——肠道篇
感染肠道的常见方式有尾静脉注射、腹腔注射、灌肠和肠系膜上动脉（SMA）注射等。其中尾静脉注射和腹腔注射操作简单，损伤性小，但是特异性较弱，感染效果不太理想。灌肠和SMA感染效果较好，本次将详细介绍这两种感染方法，文字描述最后有附上视频教程链接，小伙伴可直接将网址复制到浏览器中观看学习~
ps：尾静脉注射和腹腔注射视频教程附在文末了，有需要的小伙伴自取哦。
灌肠的操作步骤[1]：
（1）小鼠禁食过夜，并预先用NAC和匹鲁卡品处理以促进肠道隐窝黏液排出。
（2）使用异氟醚将小鼠麻醉。
（3）使用1英寸不锈钢的直圆针头直肠注射300ul 20mM的NAC清洗结肠30min。
（4）再次麻醉小鼠，然后将聚乙烯软管插入距离离肛门4厘米深的小鼠结肠部位，使用注射器缓慢注入适量的病毒；通过灌肠给予小鼠200μL AAV（推荐注射剂量至少4×1010vg/只）。
（5）注射完毕后，将小鼠在垂直倒立状态保持1分钟以上，以确保病毒在结肠部位的均匀分布；
（6）待小鼠复苏后可以恢复正常饮水及饮食。
注：灌肠需要通过小鼠肛门插管进行，因此感染深度具有一定的局限性，感染结肠的概率更大。
视频教程：
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肠系膜动脉（SMA）注射操作步骤[2]：
（1）将小鼠以右侧卧位固定在手术板上，保持四肢松弛，放入含2-4.5% O2的异氟醚诱导室进行麻醉。小鼠深度麻醉后，将其放在手术台上，对小鼠手术区域做去毛及消毒处理。
注：为保持小鼠体温，可在手术板下放置加热垫。整个手术过程在手术显微镜下放大5-40倍进行操作。
（2）手术开始前，皮下注射丁丙诺啡（0.1mg/kg）进行手术镇痛；沿左腋线最后一个肋间隙和肋下区域注射布比卡因进行局部镇痛。
（3）沿着腋线和侧腹，在脾脏区域的左侧皮肤上开一个1-2 cm的切口，切开腹外斜肌，使用微型牵引器将皮肤和腹壁固定，并用温盐水纱布覆盖小肠防止缩回，暴露SMA。
（4）在放大20倍的情况下，将SMA轻轻地从腹膜后剥离，在SMA的近端接头周围放置一个小的稳定接头连接注射针，使用微血管夹暂时切断腹主动脉的血液供应。
（5）将定制33号1/2针头连接到250μl汉密尔顿TLL气密性进样针注射器上，轻轻插入SMA进行病毒注射（200μL体积的AAV，推荐注射剂量至少5×1010vg/只）。将固定带轻扎血管，防止注射部位泄漏。
注：注射过程中使用显微镜观察以确保注射可视准确。
（6）注射后立即取下针头，缝合注射部位。取下固定带和微血管夹，使血液回流至小肠。使用无菌棉签轻轻按压注射部位进行止血。
（7）在腹腔内注射1ml无菌温盐水后，对小鼠进行缝合。
（8）术后每15min对小鼠进行一次监测，直到小鼠能够腹卧。每2小时对动物进行一次监测，直至放回笼中。
视频教程：
https://www.jove.com/cn/v/60787/targeting-rat-s-small-bowel-long-term-infusion-into-superior
使用灌肠感染肠道，推荐AAV1或AAV5，尾静脉注射、腹腔注射和SMA更推荐使用AAV9。更多关于肠道感染的问题欢迎咨询汉恒生物！
尾静脉注射：
https://www.jove.com/cn/v/61961/a-contemporary-warmingrestraining-device-for-efficient-tail-vein
腹腔注射：
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参考文献：
[1] Steven P , Annette M , Stacy P ,et al.Identification of adeno-associated viral vectors suitable for intestinal gene delivery and modulation of experimental colitis[J].American Journal of Physiology Gastrointestinal & Liver Physiology, 2012, 302(3):296-308. .
[1] Porvasnik S L , Mah C , Polyak S .Targeting murine small bowel and colon through selective superior mesenteric artery injection[J].Microsurgery, 2010, 30(6):487-493.
