今天要推荐的是来自QIAGEN的一个miRNA荧光定量的惊喜“小礼包”：miRCURY LNA miRNA PCR Starter Kit（货号：339320）

试剂盒包含逆转录试剂、SYBR Green qPCR Mix，还有UniSp6模板及引物，一个候选内源对照引物组引物（miR-103a-3p）和两个经过验证的引物组（可任选2条预制引物哦，物种包含人、大鼠、小鼠），所有试剂均通过LNA技术进行了增强。这些试剂足够定量分析多达20个样品。

关于性能，也是非常厉害的！有图有真相，可以从低至 1 pg 的总 RNA 起始材料进行准确定量！再也不用担心样本量太少没办法定量啦！

Tips：我们建议在研究miRNA表达时，选择的内参是内源性内参基因应是稳定表达的miRNAs，而不是较长的RNA物种，如snoRNAs和包括U6在内的snRNAs。这是因为miRNAs较短，在提取和逆转录过程中可能与较长的转录本有非常不同的行为。根据样本的来源，一些常用的参考miRNAs包括：hsa-miR-103a-3p、hsa-miR-423-3p、hsa-miR-191-5p、hsa-miR-16-5p、hsa-miR-423-5p和hsa-let-7a-5p。

而人工合成的RNA spike-in 在检查miRNA分离、cDNA 合成和 PCR 扩增效率差差异的过程中，可以起到全程监控的作用，可能揭示核酸酶的潜在存在。方法是分别在 RNA 分离和 cDNA 合成之前向样品中添加已知量的 RNA 掺入物，如试剂盒提提到的Unisp6，或RNA Spike-In Kit, For RT。

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