实验诊断学-骨髓细胞学检查
MICM分型：
1.Morphology形态学：
骨髓细胞形态学：准确观察骨髓细胞
骨髓病理学检查：疾病诊断依据
骨髓细胞化学染色：原位显示细胞化学成分、酶活性。
2.Immunology免疫学
骨髓细胞免疫表型分析：流式细胞学分析表面抗原。
3.Cytogenetic细胞遗传学
骨髓染色体分析：诊断分型、判断预后
4.Molecular biology分子生物学
骨髓细胞分子生物学：诊断分型、判断预后
【临床应用】
1.诊断
1）血液系统
2）代谢疾病：戈谢病(Gaucher)、尼曼匹克病(Niemann-Pick)
2.辅助诊断：骨髓转移瘤、淋巴瘤骨髓浸润
3.提高疾病诊断率：疟原虫、黑热病、SLE
4.判断疗效、预后
【方法】
1.骨髓标本采集
1）骨髓穿刺术：
（1）穿刺部位：髂前上棘、髂后上棘、胸骨柄
（2）抽取骨髓液的量：0.2ml
（3）操作：涂片送检，还可多取宋免疫、核型分析。
2）骨髓活检术：活检针取1cm骨髓组织病理检查。
2.适应症：
1）细胞：外周血细胞成分形态异常、出现原始幼稚细胞
2）体征：不明原因发热、肝脾淋巴结肿大
3）症状：
（1）骨痛、骨质破坏、肾功能异常；
（2）黄疸、紫癜
（3）血沉增加、血浆蛋白异常、免疫球蛋白异常
4）疗效：化疗疗效观察
5）其他：骨髓活检、造血祖细胞培养、染色体核型分析、微生物寄生虫检查。
3.禁忌症：出血性疾病（血友病）、晚期妊娠孕妇
【血细胞生成、发育规律】
1.起源：多能造血干细胞（自我更新、多向分化）
2.分化：
1）髓系干细胞
（1）EPO刺激：红系祖细胞
（2）GM-CSF刺激：粒、单核系祖细胞：①原始粒细胞；②原始单核细胞
（3）嗜酸性粒祖细胞
（4）嗜碱性粒祖细胞
（5）Meg-CSF巨核细胞集落刺激因子刺激：巨核系祖细胞→原巨→幼巨→颗粒巨→产板巨→血小板（TPO刺激）
2）淋巴系干细胞
（1）T淋巴系祖细胞
（2）B淋巴系祖细胞
3.血细胞发育演变过程中的一般规律（先记大条：4大条，胞质有3小条，核有4小条，再记特点、差异）
1）体积、形态：大→小，圆形→不规则形（小、特异）
（1）巨核细胞：小→大
（2）早幼粒：大于原始粒细胞
2）胞质：多，酸，特异
（1）量：少→多（淋巴细胞变化不大）
（2）染色：深蓝→浅蓝→淡红
（3）颗粒：无（原始）→嗜天青颗粒（早幼粒）→特异性颗粒（三性）
3）核：趋向凝集
（1）大小：大→小，规则→不规则分叶（巨核细胞：小→大；红系：失去核）
（2）染色质：细致疏松→粗糙致密，染色浅→深
（3）核仁：有→无，清晰→模糊→消失
（4）核膜：不明显→明显
4）核质比：大→小；巨核细胞相反。
【骨髓细胞形态学】
1.观察内容：
1）肉眼观察：选择有骨髓小粒的涂片观察
（1）多位于涂片尾部
（2）骨髓小粒缺如：混入了外周血，取材不良
（3）脂肪小滴增多：红髓成分减少，骨髓增生降低
2）低倍镜
（1）评估涂片质量
（2）估计有核细胞增生程度：
（3）计数巨核细胞：全片7-133个/片（低倍镜无法确定巨核细胞发育阶段）
（4）特殊细胞：转移的癌细胞、戈谢细胞、尼曼皮克细胞
（5）疟原虫
3）油镜
（1）涂片髓膜体尾交界处（红细胞分散均匀，中央明亮，可以看的清立体结构）观察200-500个细胞；计算各系细胞百分比、粒红比
（2）观察形态：粒系、红系、单核系、淋巴系、其他
（3）确定巨核细胞发育阶段
4）骨髓象分析报告：细胞特征、组化特征
2.检查结果的临床意义：
1）增生程度反映骨髓增生情况
2）骨髓中各系细胞和其各发育阶段的比例
3）比例改变的临床意义
（1）粒红比
（2）粒系
（3）红系
（4）淋巴系
（5）单核系
（6）浆细胞系
（7）巨细胞系
【骨髓病理学检查】
1.取材：骨髓活检术
2.方法：石蜡包埋、HE染色
3.临床意义：反映骨髓造血状态和纤维组织增生情况，协助诊断
【骨髓细胞组织化学染色】
1.常用细胞化学染色
1）髓过氧化物酶MPO
（1）原理：细胞MPO催化试剂联苯胺氧化，与试剂中亚硝基铁氰化钠形成蓝黑色颗粒，沉于细胞质。
（2）临床意义：MPO存在于粒细胞、单核细胞。
2）非特异性酯酶NSE
（1）存在细胞：单核细胞
（2）原理：NSE酶活性可以被氟化钠抑制，抑制后染色为阴性。
3）糖原染色PAS
（1）原理：过碘酸将糖原氧化为醛基，醛基于Schiff液中无色品红结合，形成紫红色化合物，在胞质。
（2）临床意义：
4）铁染色
（1）类别：
a.细胞外铁：骨髓小粒中贮存在单核-巨噬细胞内的铁（幼红细胞之外的铁）
※阳性反应：蓝绿色沉淀
※阳性分级：(-)骨髓小粒无蓝色；(+)少量铁颗粒；(++)较多铁颗粒；(+++)蓝绿色小块；(++++)极多小块
b.细胞内铁：幼红细胞内的铁（含有铁颗粒的幼红细胞为铁粒幼红细胞）
※铁粒幼细胞百分率：油镜下计数100个幼红细胞中幼粒阳性的细胞数。
※环形铁粒幼红细胞：含蓝绿色铁粒5个以上，环绕细胞核排列半周以上。
（2）参考值
a.细胞外铁：+~++
b.细胞内铁：12-44%，且无环形铁粒幼红细胞。
（3）临床意义：
5）中性粒细胞碱性磷酸酶NAP
（1）存在细胞：成熟中性粒、巨噬细胞
（2）阳性指标：胞质中出现颜色沉淀物，油镜下观察100个成熟中性粒细胞，阳性反应所占比率。
（3）参考值：成人阳性率10-40%；积分值40-80分（按照反应强度分级，加权得分）
（4）临床意义：
a.感染：细菌↑，病毒↓
b.CML↓；类白血病反应↑
c.再障↑，阵发性睡眠性血红蛋白尿症PNH↓
d. 真性红细胞增多症↑，继发性红细胞增多症-
整理：
【骨髓细胞免疫表型分析】
1.方法：流式细胞术（单抗、免疫学技术对细胞膜特异性抗原进行检测，分析细胞所属系列）
2.意义：诊断血液系统疾病。
【细胞遗传学分析】
1.染色体分析
1）方法：G显带
2）分析：染色体数目和结构
3）正常值：46,XX/46,XY
4）临床意义：
（1）造血组织肿瘤诊断与分型
（2）MRD监测：微小残留白血病
（3）监测遗传学异常和血液病的发生
（4）骨髓移植后嵌合状态检测：若发现被移植者骨髓或血细胞被供者核型取代，题是完全嵌合，骨髓移植成功。
2.白细胞常见染色体易位及融合基因
【分子生物学检测】
1.荧光原位杂交FISH
2.融合基因
参考：
诊断学（第九版）-人民卫生出版社
实验诊断学（第三版）-人民卫生出版社
