一、调节pH

通常采用三种方法调节鲎试验反应混和液的pH。

①使用高灵敏度的鲎试剂，如λ为0.06~0.03EU/ml的鲎试剂，使得检品的最大稀释倍数（MVD）增大，从而减弱或消除检品的pH因素对检查的干扰。

②用缓冲液制备样品稀释液，使检品的pH达到适合反应的范围，这样使用较低灵敏度（λ为0.25 EU/ml）的鲎试剂也可以检查这类检品。

③用酸、碱或缓冲液来调节pH。张毓梅等[1]选取了38个品种，其pH范围较宽，位于2~12之间，结果表明，pH 4 ~10的供试液由于鲎试剂本身具有一定缓冲能力，因此对检测结果无干扰，而 pH＜4或pH＞10的供试液假阴性结果出现的几率比较多，但用0. 1 mol/L的HCl或NaOH溶液调整供试液pH在6~8内，用灵敏度λEU/ml鲎试剂进行干扰试验，其抑制现象消失。

 二、调节金属离子

最好的消除因鲎合作用而导致离子不足的方法是计算二价离子需要量，然后补充等摩尔无热原的二价离子盐。但常用的方法是通过稀释来消除络合作用。如血液保存液的主要成分是枸橼酸和枸橼酸钠，由于枸橼酸根离子对凝胶法有干扰，因此王洪等[2]采用稀释法对3种血液保存液进行了干扰试验，结果Ⅰ号抗凝液和血液保存液Ⅱ（ACD-B）稀释44倍，红细胞保存液（MAP）)稀释22倍后，相对应地使用0.125 EU/ml和0.25EU/ml鲎试剂，可以排除供试品的干扰。

美国FDA的鲎试剂检查准则允许使用辅助剂来消除鲎试剂检查的干扰因素。稀释剂（Ⅰ）是用于枸橼酸盐类抗凝剂及血液保养液的细菌内毒素检查的一种辅助剂，它含有一定浓度的二价离子，可以饱和枸橼酸盐的鳌合反应，维持鲎试剂的正常灵敏度，并有较佳的缓冲能力，用本稀释剂（Ⅰ）辅助剂作抗凝剂、血液保养液的细菌内毒素检查，可以使用常用灵敏度的鲎试剂，无需对检品作较高的稀释。

喹诺酮类药物结构中3，4位为羧基和酮炭基，极易和金属离子如钙、铁，镁，锌等形成鲎合物，导致了TAL灵敏度下降。加入适量的 Mg2+（稀释剂—Ⅰ），以补充供试品与鲎试剂混合后鳌合的部分来消除干扰作用[3]。

人免疫球蛋白（IVIG）对细菌内毒素检查法有强烈的抑制作用，单纯用简单稀释和调整pH法无法消除干扰，用稀释剂（Ⅰ）对IVIG作4倍以上稀释，可以消除其对TAL凝集反应的干扰，可能是IVIG中的球蛋白分子与TAL的二价阳离子结合，而稀释剂（Ⅰ）含有一定浓度的二价阳离子，可维持TAL正常灵敏度所需的二价阳离子，并且稀释剂（Ⅰ）有较强的 pH 缓冲能力，能使反应介质保持反应所需的最佳pH[4]。但要注意，二价离子加入试剂会增加鲎试剂灵敏度，因此调整含有Ca2+ 、Mg2+等二价盐的药品离子水平时应特别注意，避免增强内毒素反应。

参考文献：

[1] 张毓梅,代晓静,郑长眷,等.供试品溶液的pH对细菌内毒素检查法结果的影响[J].中国药学杂志.2007,42(8):621-623

[2] 王洪,王欣,张晓寒,等.BET法检测3种血液保存液细菌内毒素的效果观察[J].中国输血杂志,2007,20(1):49-50

[3] 韦群,粱丹,陈瑜.喹诺酮类注射液细菌内毒索检查方法的研究[J].广东药学院学报.2004,20(1):24-27

[4] 郭采平,张剑平,黄晓华.静注入免疫球蛋白细菌内毒索检查方法的建立[J].中国生物工程杂志,2004,24(5):84-86 [J].

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本文节选自：《凝胶法细菌内毒素检查的干扰因素及消除》，文章作者：何进。如有侵权，请联系删除，谢谢！