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中和试验老是失败,你的问题出在哪里

2023-02-22 17:07 作者:大家好我是常明谦  | 我要投稿

前情提要:

中和试验是做疫苗的小伙伴最终都要面临的操作,不可避免都要会做,而且结果必须精准。疫苗好坏的评估离不开这个最核心的数据,疫苗的另外一个评估手段就是动物保护试验,这个是在动物本体上进行,更加复杂,所以在细胞水平上 的操作更加需要我们掌握,但是我在做中和时候老出现问题,比如血清污染,还有就是对照病毒的不成立,这种很打击我的热情和信心。

下面针对我之前出现的问题及之后进行的针对性措施进行总结(末尾有详细操作)。有问题都可以私信交流,本人有着失败的经验和成功的经验。

Q:待检血清的污染问题

从动物上采集分离的血清,在上细胞后污染了,这是太打击人了,但是不注意细节的这点往往造成很大的麻烦。

A:首先添加双抗,1%的双抗能够避免很多问题,虽然有的人不喜欢加双抗,怕影响细胞的状态是,但是为了避免污染,必须要进行双抗的添加。其次,分离血清时候,必须使用灭菌的EP管子,分离全程在超净台操作。

Q:结果不准确,比如病毒接毒后,细胞不感染,那就是病毒对照不成立,中和结果的判定基本就废了。

A:测定TCID50要准确,不要似是而非,这就是确保细胞的状态没问题,细胞必须要健康正常,不要拿状态不好的细胞进行测定 ,不然也是白搭。养好细胞再做实验,这是很多人没注意的问题。

Q:做完之后,进行判定结果。

A:很多人对TCID50和中和的判定是完全没概念,这种是需要完全按照Reed-Muench两氏法判定法进行,这个一开始看不懂,可以找师兄师姐完全搞明白再进行中和试验,不要想当然的进行实验。

还有具体的问题,可以多多交流呀。

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