特发性血小板减少性紫癜动物模型【动物实验外包】

特发性血小板减少性紫癜动物模型【动物实验外包】

【造模机制】特发性血小板减少性紫癜(idiopathic thrombocytopenic purpura,ITP)是临床常见的免疫疾病，主要是由于体内产生大量血小板相关的自身抗体(PAIg)，PAIg 同血小板结合，引起血小板的破坏增多。通过免疫法制备实验动物的自身抗体（PAIg)，注入自身抗体后，诱发实验动物的特发性血小板减少性紫癜发生。

【造模方法】选用 BALB/c小鼠、豚鼠。实验方法：

1.抗原的制备 BALB/c小鼠，8周龄，18~22g，雌雄各半；摘眼球或眶静脉采血，ED-TA-Naz 抗凝；梯度离心分离血小板并洗涤，调整浓度为(1~2)×10°/L。

2.豚鼠抗 BALB/c小鼠血小板血清(GP-APS)制备 取以上血小板悬液分别与等量的弗氏完全佐剂和弗氏不完全佐剂混匀，制成乳白色油包水状的抗原。第1周取含弗氏完全佐剂的抗原分别注射于豚鼠的后足掌、背部皮下及腹股沟；第2周、3周、5周取含弗氏不完全佐剂的抗原分别注射于豚鼠后足掌、背部皮下及腹股沟，前后共4次注射，每次注射至少5点，每点100μ1；第6周取豚鼠不抗凝全血,1800r/min,离心 10分钟后取上清液，即为豚鼠抗小鼠血小板抗血清（GP-APS），-20℃冰箱储存备用。

3.抗体效价的检测 采用简单的琼脂扩散法，自制 10g/L 琼脂平板,用打孔器打成梅花形孔环，中间孔滴加免疫浓度血小板悬液，周围孔滴加不同浓度的抗血清，37℃温箱孵育24小时观察沉淀弧，确定最佳血清稀释度。

4.急性短期 ITP模型于 BALB/c 小鼠腹腔内一次性注射抗血清 100μ1。

5.慢性持续ITP模型分别在第1天、3天、5天、7天、9天、11天、13天于小鼠腹腔注射抗血清，每次100μl，在第15天取材。

【模型特点】BALB/c小鼠注射抗血清后，皮下可见散在出血点、瘀斑；血小板在短时间内大幅度下降；PAIgG检测阳性；骨髓巨核细胞数量在急性实验中有轻度增加，慢性实验明显增加。

【应用范围】本模型可作为研究特发性血小板减少性紫癜发病机制及其防治药物的药效学研究。

【注意事项】

1.分离出血小板时避免混有红细胞 否则免疫豚鼠所得的抗血清中会含有大量的抗红细胞抗体，再注射造模动物会引起血清病而导致死亡。

2.血小板悬液与弗氏佐剂必须混合完全，乳化充分 否则免疫不易成功。免疫动物注射部位易感染，应注意局部消毒。

3.慢性ITP模型的建立应注意 首次注射的量应稍大，并且连续注射若干次后，由于小鼠机体内也会产生抗 APS的抗体。如果停止注射抗血清后3天左右小鼠的血小板就会逐渐恢复正常，随后会代偿性大幅度反弹。

【模型评估】本模型结果稳定，方法简单，容易复制。

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