质粒转化实验
1 前言说明
本课题组的感受态质粒来自公司，天根、全式金等。DH5α感受态细胞是采用大肠杆菌DH5α菌株经过处理得到的感受态细胞，可用于DNA的化学转化。不同公司的操作流程可能存在些许差异，但大体上是不变的。
本实验方案是收纳及归纳个人在实验过程中的执行方案。
2 质粒转化实验
2.1实验设备及材料信息
1.DH5α（一种常用于质粒克隆的菌株）100ul;
2.目的DNA准备：重组，酶连接，定点突变，普通DNA转化等
3.制冰机提前打开、超净工作台提前30min紫外，
2.2实验操作程序
E.coli DH5α Cells使用前在冰上融化（冰盒准备），取用1管感受态细胞（以100ul为例）置于冰浴中。
轻弹混匀，分装50ul到另一个1.5ml 离心管：转化管和阴性对照管（microcentrifuge tubes)（忌剧烈振荡混合细胞，防止破裂）
加入DNA样品（吸取0.5ng-1ng）到转化管，轻弹混匀（所用DNA体积不超过感受态细胞悬液的1/10）
冰中放置30min，期间将金属浴锅加热至42℃（待用，热激）
42℃放置60s-90s（不同试剂盒热激时间有差异，注意）后立即转入冰中放置2-3min（严格计时，及时转入，不要摇晃离心管）
每管加LB培养基(L-broth）（预先在37℃保温），至终体积为500ul（不含抗生素）
37℃摇床振荡培养45-60min(200rpm)（目的是使质粒相关抗性标记基因表达，使菌体复苏）
将离心管内容物混匀，吸取100ul已转化的感受态细胞加入到LB固体琼脂培养基上（含相应抗生素），用无菌的弯头玻棒轻轻将细胞均匀涂开。（平板置于室温直至液体被吸收）
倒置平板，37℃培养12-16h（计算好时间，避免超过16h）
【克隆化培养（小）】挑出3-5个克隆，转移到装有2-3ml LB培养基（含抗生素）（根据细菌繁殖速度和所需密度）的摇菌管中培养12-16h
取0.2-1ml的菌液，送去测序。
【克隆化培养（扩大）】一般情况，等测序结果，选择正确目标进行扩大培养，用于后续的中提/大提。
【菌种保藏】中提培养在离心储存前保留部分菌种，以1:1比例将500ul甘油和500ul菌液混合加入到离心管中，封口膜封闭，-80℃储存。（无菌操作）
