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摇床对细胞培养条件会造成哪些影响?

2023-06-27 13:45 作者:健微讲堂  | 我要投稿

来源:“Eppendorf实验室”公众号
原标题:让悬浮细胞培养1+1>2的秘诀是……

当我们在进行重组蛋白表达或生物反应器起始培养物(接种物)的生产时,哺乳动物细胞悬浮培养是非常重要的一环。

影响细胞培养的因素非常多,为了优化细胞生产条件,需要控制培养基的温度和 pH 值,还需要持其体积,以避免代谢物、钠离子等浓度的显著变化而造成不利影响。

图 1:进行哺乳动物细胞悬浮培养的摇瓶

例如,哺乳动物细胞悬浮培养大多需要在摇瓶中进行,但是摇瓶在震荡过程中,会增加培养基的蒸发,产生体积变化,所以尤其需要注意。

当细胞在培养过程中,摇瓶、摇床和培养箱都会对培养环境造成影响,所以优化培养环境需贯穿始终。

适当的培养条件由具有高相对湿度(RH%)的富含 CO2 的气体环境提供,这就需要有专门的设备来控制并维持。

今天小 编 就从一些容易忽视的细节出发,来聊一聊摇床对细胞培养条件会造成的影响。

图 2:在 CO2 培养箱内放置摇床进行悬浮细胞培养

01 摇床的散热量

在 CO2 培养箱中使用摇床会给培养箱环境带来额外的热量。由于 CO2 培养箱是隔热的,通常缺乏主动冷却功能,这种额外的热量可能会破坏 CO2 保温箱的温度控制。高于生理温度仅 1℃ 的升温会对细胞生长产生不利影响。

02 摇床的重量和震动

如果 CO2 培养箱同时在培养贴壁细胞,由于摇床的重量很容易超过搁板支架的负载(通常在 10 kg 的范围内),因此可能会发生搁板弯曲,从而导致培养皿/瓶的倾斜,贴壁细胞的培养基条件就会发生差异。除此之外,摇床运行造成的震动也会干扰箱内其他细胞生长,如对震动敏感的细胞如干细胞或原代细胞。

03 摇床造成的污染隐患

预防污染对于避免细胞样品损失、重复进行实验以及处理污染造成额外的成本显得尤为重要。高温消毒已成为 CO2 培养箱防污染的重要措施。因此,理想情况下,摇床应在箱内同时进行高温消毒(120–180°C)。

但目前市场上还没有一款摇床能够完全耐受高温,所以在对 CO2 培养箱进行消毒之前,需要将其移除。当重新放置摇床的时候,就会产生引入污染的风险。

图 3:建议在 CO2 培养箱内测试摇床的性能,以确保其不会产生冷凝水而增加污染风险

在培养箱内放置摇床不仅会对细胞培养条件产生影响,而且培养箱内温暖、高湿(相对湿度约 95%)和微酸性的环境对摇床来说是一个严苛的工作环境,尤其是在腐蚀方面,这对摇床的使用寿命来说也是一个很大的考验。

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