作者︱王琳

来源︱Bio-protocol第三届生物实验短视频大赛

ImageJ是一个用Java语言开发的图像处理和分析平台，能够对多种图像进行处理和分析的免费软件。ImageJ在生物学研究当中应用十分广泛，可以用于细胞计数、细胞分析、形态测量等。GraphPad Prism是一个能够对数据进行统计分析并进行绘图的常用软件。

在生物学研究当中，我们经常通过western blot实验对实验组和对照组的蛋白表达水平进行比较，首先需要一个内参作为对照，将其调整到同一水平，即均一化，然后再对需要比较的蛋白的表达水平进行比较。

我们可以通过软件ImageJ测量western blot条带的灰度值，通过将内参均一化，来比较实验组与对照组相比蛋白浓度的变化，并通过Prism将数据量化作图展示出来。

一、实验样品与仪器软件

1. 样品信息

实验组和对照组的Western blot条带图（内参和目的蛋白）

2. 仪器和软件

ImageJ，GraphPad Prism

二、实验操作

在ImageJ中通过 File→Open 分别打开内参和目的蛋白的western blot图，然后将胶图通过Image→Type→8-bit将图片转为8位的灰度图，用矩形选框工具（工具栏第一个）框选同一行的所有条带,按Ctrl+1，紧接着按Ctrl+3，得到峰形图,用直线工具，将所有小峰图封闭起来,选择魔法棒工具，依次点击封闭后的各个小峰，即可得到灰度值。然后将内参的灰度值均一化，去比较目的蛋白的灰度值，并用Prism量化。

三、注意事项

Western blot的图片尽可能的条带清晰，背景较浅，这样测出来的灰度值会更准确。

四、作者与课题组简介

作者简介

王琳，中国科学院遗传与发育生物学研究所博士生在读，主要研究方向为染色质的表观遗传调控在染色质复制过程中的功能以及小米抗旱抗盐位点的筛选及功能研究。

课题组简介

导师：姜丹华，博士，研究员，博士生导师

研究方向：植物染色质调控；作物耐逆的分子遗传机理。

实验室主要研究植物染色质调控以及植物适应环境，耐逆的分子遗传机理。

Bio-protocol 简介                                 

Bio-protocol于2011年在斯坦福大学创建, 致力于搭建全球权威的、高质量的生物实验方案分享平台，以助力科学发现。Bio-protocol期刊是Bio-protocol旗下的一份同行评审的国际学术期刊，发表高质量的生命科学实验方案，旨在提高科研的可重复性。至今，Bio-protocol已发表了来自全球上万名优秀科研工作者（包括多名诺贝尔奖获得者）的4000多篇实验方案，并且同 Science、eLife等12家国际权威科学杂志建立长期合作关系，共同促进生命科学研究的可重复性。2019年Bio-protocol期刊已被PubMed Central，ESCI收录。

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