激光共聚焦显微镜学习LSM800的使用 3-2

然后切换到第二个界面acquisition，嗯，首先从第一行第一列的第一行开始，我们可以通过smart setup进行荧光染料的设置，点击smart set up。然后会出来一个对话框，然后通过点击加号进行添加荧光通道啊，我的一个是在在recent里有好，双击添加也可以，或者是选中通道，点击右下方的ad也可以，好另外还有一个是CY3，那在recent里面没有，那我可以在测试里面输入CY，然后找一下CY3，点击选中，然后添加at，就是右下角有个close或者上方的叉，关掉这个对话框，然后你如果觉得这个他给你设置的荧光是浅蓝色，不是那么显眼，你可以点击右方的小三角，然后把它啊换成blue啊，同样的第二个如果他给你是橙黄色。你觉得不是那么明显，那你可以把它变成。Right，然后呢，选择best signal，点击OK，这时候呢，我通过smart set up设置出来两个荧光通道，一个是depi，一个是CY3好，下面一行按钮呢，主要用到的是第三个live预览以及第五个snap拍照，下面是高级功能，等大家用到的时候可以嗯，找我一下啊，我再教一下大家，然后下面呢，就是我们刚刚设置出来荧光通道啊一二，然后呢，这个最下方有一个esid呢，这个是明场，如果你拍的是细胞，可以把它勾选上啊，这时候你对应的荧光通道下方就会出来一个名场，那我现在是组织，我就不需要这个，那就不需要勾选它，好第二列。上方第一行显示的是我选择的物径，然后呢，大概看一眼frame size1024乘以1024，如果不对呢，选择S乘以Y，然后自动自己再手动选择一下也可以啊，然后呢，Speed是七二，Number呢选择二或四都可以啊，一般我们默认的就是选择二，就图像质量就可以，如果你有嗯，图像数据不是特别理想，或者是又是发文章的重要数据的时候，你可以选择四，这时图像质量会更好一点。然后呢，在下一行是我们的scan area是我们的扫描的区域，这个框框对应的就是我扫描区域的大小，视野范围的大小，默认呢是1.0，那它最最大呢可以放到0.5，你可以根据自己的需要进行选择，那我现在reet啊，恢复到默认值，然后下面一行就是我这应的我刚刚设置的两个通道。JP和CY3，嗯，然后在下面一行呢，对应的是我们所需要用到的这它们对应的激激发光，然后CY3呢是561栽P呢是405激发的，以及他们对应的荧光的电压值啊，然后呢，Master gain值啊，嗯，这个值呢，Master更值，一定要注意不要超过800啊，它会它会让你的太高的话，会让你的噪点会比较大，因为我刚刚是用目镜找胶的啊，所以我现在选中dePi通道，然后点击那按钮。然后这时候就出来一个图像，出来的是什么？出来的是我的细胞核组织当中的细胞核的图像，我可以通过调焦，然后。将它调整到一个比较好的状态。啊，可能是这个状态吧，我一会再看一眼CY3的通道，如果觉得稍微有点暗，你可以增加这个master电值啊，但是注意不要超过800，然后如果觉得还可以增加什么呢？还可以增加这个电压值百分之多少，默认是0.2%，但它跟上一个用户关闭软件的时候的程序也有一定关系哦，现在是1.41.5，当然这时候其实已经曝光过了，那我可以稍微适当降一下啊。这个值好，我可以点击点击stop，点成stop之后呢，切换到第二个通道CY3，选中它，然后继续点击来，我看一下在这个通道下，我的荧光会怎么样明显呢，在这个数值。下我的荧光，CY3的荧光呢，是偏弱一点的，那我可以适当的把这个值增加一下，现在呢，它是0.2%和750，那我首先选择把这个电压值稍微加一下，好这时候我的出来细节了，我的荧光的细节出来了啊。好，这时候我可以针对它来进行微微调一下焦，调到一个比较适合展示我细胞形态的一个状态，然后呢，也可以通过。拨动这个操作杆。调整到我所关心的区域，这个呢就是操纵杆，然后你轻轻的前后左右都可以移动。将我的样本调整到比较合适的区域呢，我同样的是把这个level呢，点击stop之后，我就可以点击snap。进行拍照，首先出来的是一个红色的我的CY3的图像，然后紧接着出来一个蓝色的细胞核的图像，在2D状态下呢，你看到的是一个墨纸的图，然后你点击speed，看到的是红色，蓝色以及墨纸的图，一共是三张，但无论怎么样，你保存的图像里面，文件里这三张都是有的，然后你可以在这儿点击。Save保存到你要的文件夹里啊，然后我们这个呢，是放在D盘data文件夹里啊，然后你可以建一个你的导师的名字，然后建立一个今天的日期，然后建立这个组，比如说他是K组吧。好，我所有的这个组的样品都保存在这个文件夹里，点击右下角的对保存，如果说这个样品当中时候，我对这个和这个细胞比较感兴趣，想把它俩放在一起放大一下，看一下效果啊。