染色步骤丨Calcein-AM/PI，活细胞/死细胞双染试剂盒

Calcein-AM/PI，活细胞/死细胞双染试剂盒Calcein, AM 是一种可对活细胞进行荧光标记的细胞染色试剂，它穿透细胞膜进入细胞后被细胞内的酯酶剪切形成 Calcein，从而被滞留在细胞内，发出强绿色荧光。

与其它同类试剂（如 BCECF, AM 和 CFDA）相比，Calcein, AM 的细胞毒性很低。Calcein 的激发和发射波长分别为 490 nm 和 515 nm。Calcein, AM 仅对活细胞染色。

作为核染色染料的 PI 不能穿过活细胞的细胞膜，它穿过死细胞膜的无序区域而到达细胞核，并嵌入细胞的 DNA 双螺旋从而产生红色荧光（激发：535nm，发射：617 nm），因此 PI 仅对死细胞染色。由于 Calcein 和 PI-DNA 都可被 490 nm 激发，因此可用荧光显微镜同时观察活细胞和死细胞。用 545 nm 激发，仅可观察到死细胞。由于不同细胞系的最佳染色条件不同，我们建议个别确定 Calcein, AM 和 PI的合适浓度。

艾美捷 Biogradetech Calcein-AM/PI，活细胞/死细胞双染试剂盒：

中文名称：Calcein-AM/PI，活细胞/死细胞双染试剂盒

英文名字：Calcein-AM/PI, Live/Dead Cell Double Staining Kit

Biogradetech货号：B-CHK103-500T

规格：500T

保存建议：Calcein-AM/PI，活细胞/死细胞双染试剂盒保存：-20℃干燥避光 有效期一年。

图1.Calcein-AM/PI细胞双染试剂盒染色案例（左图：Calcein-AM染FTC细胞（活细胞单染）中图：PI染HCT116细胞（死细胞单染）右图：Calcein-AM、PI染MHD-1 细胞（活死细胞双染））

Calcein-AM/PI，活细胞/死细胞双染试剂盒染色步骤：

1、 用Trypsin-EDTA消化细胞。

2、 通过离心收集细胞（1,000 rpm，3 min）。

3、 去除上清液，加入PBS（-）制备细胞悬液（105 - 106 cells/ml为宜）。

4、 重复步骤2和步骤3数次以消除培养基中的酯酶活性。

5、 取100 μl 染色工作液与200 μl 细胞悬液混合，在37℃培养15 min。

6、 在490±10 nm激发波长下同时观察黄绿色荧光的活细胞和红色荧光的死细胞。另外用545 nm激发波长单独观察死细胞。