Cell Counting Kit-8，简称CCK-8试剂盒或CCK8试剂盒，是一种基于WST-8而广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速、高灵敏度检测的试剂盒，可用于细胞因子等诱导的细胞增殖检测，也可以用于抗癌药物等对细胞有毒试剂诱导的细胞毒性检测，或一些药物诱导的细胞生长抑制检测。

检测原理：该试剂中含有WST-8（水溶性四唑盐），在电子载体1-Methoxy PMS（电子传递介质）的作用下被细胞中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲臜产物（Formazan dye）。生成的甲臜物的数量与活细胞的数量成正比。因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。

CCK-8细胞增殖检测常见问题及注意事项

问 为什么测出的吸光度数值较低？

答
1. 细胞数量过低——可以适当增加待测细胞数量；
2. 染色难度大——建议增加CCK-8孵育时间。

问 为什么数据重复性差？

答
1. 孔板最外圈试剂容易挥发，建议最外一圈的孔只加培养基，不作为测定孔用。
2. CCK-8沾壁，建议加入CCK-8后，轻轻敲击培养板以帮助混匀。
3. 细胞数量过多或过少，建议预先在1000-100000个/孔范围内摸索条件。
4. 孔内气泡干扰酶标仪检测，检测前需确保每个孔内无气泡。

问 在做细胞的加药实验时，药物对CCK-8测定是否有影响？

答

1. 注意如果药物具有还原性(如维生素C)，会和CCK-8发生显色反应，增加吸光度。

2. 药物中的金属对CCK-8显色有影响：当终浓度为1mM的氯化亚铅、氧化铁、硫酸铜会抑制5%、15%、90%的显色反应，使灵敏度降级。如果终浓度是10mM的话，将会100%抑制。
    解决办法：首先要确认药物是否有吸收，在含有药物的培养基中加入CCK-8，测定450nm的吸光度，如果它的吸光度比不含药物的培养基(加CCK-8)的吸光度高，则证明药物有影响，可在加CCK-8之前更换培养基，去掉药物的影响。

3. 由于培养基中可能含有氧化还原反应的物质，在正式实验之前，建议使用一个孔作一下检测，有必要先确认培养基和CCK-8是否反应，一般正常的OD值应该在0.4以下。

问 可否采用CCK-8法进行药物的IC50检测？

答 可以，将细胞培养后按照不同浓度的药物处理一定时间后进行CCK-8检测，根据吸光度绘制曲线，计算该药物抑制细胞数量一半时的浓度(IC50)。

问 CCK-8对于不同的细胞，灵敏度是否一样？

答 不一样，悬浮细胞较贴壁细胞难染色。对于贴壁细胞，一般加入CCK-8培养1-4小时吸光度已经很高，但对于悬浮细胞则可能吸光度较低，可以通过延长CCK-8的加入时间或增加细胞数量来解决。

问 若是暂不检测OD值，该如何处理？

答 若暂时不测定 OD 值，可以向每孔中加入 10μL 0.1 M 的 HCl 溶液或者 1% w/v SDS 溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24 小时内测定，吸光度不会发生变化。

问 用CCK-8测细胞活力时每次都要做标准曲线吗？

答 建议每次做，虽然细胞是一样的，但是细胞的状态不一定一样。对于状态不一样的细胞，建议每次做标准曲线。

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