Southern印迹（简介、应用、步骤）

什么是Southern印迹

Southern印迹是一种杂交技术，用于鉴定样品中的特定DNA。该技术最初由Edward M. Southern于1975年开发。该过程可识别样品中特定 DNA 序列的 DNA 序列、大小和丰度。Southern印迹膜如图1所示。

图1：Southern印迹膜

Southern印迹的应用

Southern印迹的应用如下所述。

• 检测特定 DNA 片段

• 分离特定的 DNA 片段

• 识别突变和基因重排

• 在 RFLP 测定中（限制性片段长度多态性）

• 识别遗传性疾病

• 识别传染性病原体

• 亲子鉴定

• 在DNA指纹识别中识别罪犯

Southern印迹步骤

Southern印迹涉及通过凝胶电泳根据大小分离DNA片段，将它们转移到膜中，用标记的序列特异性探针杂交它们，并检测标记的条带。Southern印迹的步骤如下所述。

1. DNA消化 – DNA样品被限制性内切酶消化以获得DNA片段，这些片段通过PCR扩增。

2. 凝胶电泳 – DNA片段通过凝胶电泳进行尺寸分馏。

3. 变性 – 将具有分馏DNA的凝胶浸泡在NaOH或HCl中以使双链DNA变性。

4. 印迹 – 凝胶中的DNA片段通过称为印迹的过程转移到带正电的尼龙膜中。

5. 烘烤和封闭 – 烘烤带有DNA片段的印迹纸以将DNA固定在膜上。然后，用牛血清白蛋白（BSA）或酪蛋白处理未占用的结合位点使其饱和。

6. 与标记探针杂交 – DNA结合膜用标记探针处理，该探针包含与感兴趣的DNA片段的互补核苷酸序列。杂交探针的长度通常为100-500 bp，并用放射性核苷酸标记。

7. 通过放射自显影进行可视化 – 在放射自显像下对探针结合膜进行可视化，以获得感兴趣的DNA片段的模式。

图2：Southern印迹

结论

Southern印迹是一种杂交技术，用于从样品中鉴定特定的DNA序列。在此过程中，DNA样品被限制性内切酶分馏，混合物在凝胶上电泳。然后，将凝胶中的条带图案转移到尼龙膜中并与标记的探针杂交，从而可以检测感兴趣的片段。