基因工程—PCR技术~有点难？【选必三】|0基础救星！
3.2.1 PCR技术
一、PCR定义及原理
1.定义
依据半保留复制，在体外提供参与DNA复制的各种组分与反应条件，对目的基因的核苷酸序列进行大量复制的技术。
2.PCR的原理
PCR技术是一种在体外快速扩增特定基因或DNA序列的方法，故又称为基因的体外扩增法，也称聚合酶链式反应，原理为DNA的半保留复制。在用PCR技术扩增DNA时，DNA的复制过程与细胞内的DNA复制类似。
3.特点
①多起点
②双向
③边解旋，边复制
④半保留
二、PCR的条件及过程
1.条件
（1）模板：DNA母链
（2）原料：4种脱氧核苷酸
（3）引物：使DNA聚合酶能够从引物的3"端开始连接脱氧核苷酸
①长度通常为20-30个脱氧核苷酸
②引物自身不应存在互补序列而引起自身折叠，引物之间不应存在互补序列
③PCR反应中有两种引物
（4）耐高温的聚合酶（Taq DNA聚合酶）：催化合成DNA子链。
（5）缓冲液、Mg2+：提供PCR反应合适的酸碱度与某些离子；Taq酶的活性需要Mg2+。
2.过程
PCR的过程包含变性、复性和延伸三个阶段。
三、PCR扩增产物的电泳检测
1.方法及原理
（1）方法：琼脂糖凝胶电泳
（2）原理：
①DNA分子在碱性缓冲液中带负电荷，在外加电场作用下会向正极泳动。DNA分子质量越小，迁移速率越快。
② 凝胶中的DNA分子可通过核酸染料染色被检测出来。如核酸染料溴化乙锭（EB)
2.材料及过程
(1）材料用具：电泳装置（包括电泳仪、电泳槽、制胶槽、梳子等）、微量移液器、紫外检测仪、电泳缓冲液、凝胶载样缓冲液、琼脂糖和核酸染料等。
（2）过程：配胶→点样→电泳→检测
3.电泳图分析
（1）Marker（M）：标准样，一个已知分子质量的DNA样品，作为对照，用来确定待测样品中DNA的相对分子质量。
（2）DNA荧光条带：
①条带的有无：代表是否成功扩增出待测样品中的DNA。若无条带，常见原因有：无DNA模板，引物设计不合适。
②条带的亮度：代表扩增的DNA数量，越亮代表DNA数量越多
③条带的位置：常代表DNA的大小。一般距离点样孔越远，说明跑的越快，DNA的分子质量越小。
4.PCR的应用
广泛应用于基因工程目的基因的获取、遗传病的诊断、刑侦破案和DNA序列测定等。
