【维真生物-知识分享】RNAi常用工具比较：siRNA和shRNA

siRNA和shRNA作用原理

shRNA和siRNA都是通过RNAi途径介导基因的沉默，但两者转染媒介、构建方式和细胞内加工过程不完全相同。

siRNA可以在体外合成后通过转染进入细胞，也可以将其dsRNA前体转染入细胞，dsRNA在细胞质内经过一系列酶处理，形成siRNA，之后siRNA与RISC结合并介导RISC与靶mRNA结合，导致靶mRNA的切割和降解。

shRNA则需构建至表达载体中，利用质粒或病毒媒介进入细胞，在细胞核内通过转录和剪切形成，之后shRNA转运出细胞核，在细胞质内经过Dicer酶处理后形成siRNA，进而导致靶mRNA的切割和降解。

siRNA和shRNA的区别

1. shRNA具有更长的作用时效：siRNA的稳定性较低，进入细胞后会逐渐被降解，因此只能在短期内（一周左右）实现对靶基因的沉默；shRNA借助表达载体可以在细胞内大量转录，因此靶基因的沉默时效更长，可以持续数个星期。

2. shRNA对于难转染的细胞效果更好：siRNA主要通过转染进入细胞，难转染的细胞会严重影响siRNA的功能；shRNA可借助病毒导入细胞，对于难转染的细胞仍然有很高的导入效率，因此对于难转染的细胞干扰效果更好。

3. shRNA脱靶率更低：有证据表明shRNA的脱靶更低，可能是由于siRNA在细胞质中逐渐降解导致脱靶。