动物实验AAV感染指南——肝脏篇

上期我们介绍了感染神经系统的常见注射方法。本期主要介绍感染肝脏的注射方法，使用AAV8或AAV9尾静脉注射和腹腔注射是常用的系统性感染方法。此外，还有靶向性更强的肝实质注射、肝门静脉注射和脾包膜内注射三种感染方法，本期将主要介绍这三种方法，部分方法有附上视频教程链接哦，小伙伴可直接将网址复制到浏览器中观看学习~

 

 

图1 感染肝脏的肝内、脾内和门静脉输送途径示意图

 

肝实质注射操作步骤[1]：

1、麻醉小鼠，在小鼠的眼睛上涂上眼药膏，防止眼干；

2、使小鼠仰卧，腹部朝上，对第二肋骨和第四乳头之间的区域进行脱毛处理；

3、对脱毛区域进行消毒，用手术刀划开腹部正中区域暴露肝左外叶；

4、使用29G针头胰岛素注射器吸取病毒液缓慢注射到肝实质中，选择3-5个不同的位点注射，总量100-200μL；

注：在注射过程中通过手术立体镜监测注射部位，如果观察到被膜下出血或注射物外渗，需取出针头，用无菌棉轻轻按压止血，然后选择另一个部位进行注射。

5、用无菌棉轻轻按压止血，4-0线缝合伤口；

6、将小鼠放回笼中，保持小鼠身体足够温暖，以利于苏醒。

 

肝门静脉注射操作步骤[2]：

1、注射前1h麻醉小鼠，在小鼠的眼睛上涂上眼药膏，防止眼干；

2、使小鼠仰卧，腹部朝上，对第二肋骨和第四乳头之间的区域进行脱毛处理；

3、对脱毛区域进行消毒，用手术刀划开第二肋骨和第四乳头之间的区域，长度约3cm，注意不要伤及乳腺、肠道、肝脏等其他组织；

4、用消毒棉签小心把大小肠等内脏拉出来，用纱布轻轻遮盖防止触碰，找到肝门静脉；

5、事先用32G针头注射器吸入50-100μL病毒液，在肝脏下方距离约1cm的位置，以小于5°的夹角沿着肝门静脉缓缓插入3-5mm；

6、缓慢注射病毒液，注射完毕停留3-5s再拔出针头并用棉签轻轻按压片刻，接着用止血棉覆盖肝门静脉；

7、用棉签轻轻按压5min止血，这一步务必确保止血完成，否则继续按压，直至止血完成；

8、拿出止血棉，若止血棉与组织粘连严重可用无菌PBS湿润；

9、将拉出的脏器轻轻归位，4-0线缝合伤口，10-15针；

10、将小鼠放回笼中，保持小鼠身体足够温暖，以利于苏醒。

 

视频教程：https://mp.weixin.qq.com/s/lLKNTlAeteqw63h2ejrG7A

 

脾包膜内注射操作步骤[3]：

1、注射前1h麻醉小鼠，在小鼠的眼睛上涂上眼药膏，防止眼干；

2、使小鼠仰卧，腹部朝上，对手术区域进行脱毛处理；

3、对脱毛区域进行消毒，用手术刀在腹部左侧划开一个长度约1cm的切口，暴露脾脏；

4、用30G针头注射器吸入100μL（1×1011vg）病毒液，于脾包膜下注射；

5、用无菌棉轻轻按压止血，3-0线缝合伤口；

6、将小鼠放回笼中，保持小鼠身体足够温暖，以利于苏醒。

 

表1 不同注射方法的优缺点和病毒用量

以上就是感染肝脏常用的直接注射方法，AAV8或AAV9搭配TBG启动子尾静脉注射或腹腔注射同样可以实现肝脏特异性感染，另外汉恒生物还可提供alb、Apoe肝脏特异性启动子，小伙伴可根据实验目的选择合适的启动子。更多关于肝脏感染的问题欢迎咨询汉恒生物！

参考文献

[1] Sferra, Thomas J., Backstrom, Kristin., Wang, Chuansong., Rennard, Rachel., Miller, Matt..  Widespread correction of lysosomal storage following intrahepatic injection of a recombinant adeno-associated virus in the adult MPS VII mouse. Molecular therapy: the journal of the American Society of Gene Therapy, 2004, 10(3):478-91.

[2] Sherman, Alexandra., Schlachterman, Alexander., Cooper, Mario., Merricks, Elizabeth P., Raymer, Robin A.. Portal vein delivery of viral vectors for gene therapy for hemophilia. Methods in molecular biology (Clifton, N.J.), 2014, 1114.

[3] Nakai, H., Herzog, R W., Hagstrom, J N., Walter, J., Kung, S H.. Adeno-associated viral vector-mediated gene transfer of human blood coagulation factor IX into mouse liver. Blood, 1998, 91(12):4600-7.